2)有效剂量的计算与测定:按人的用量+Var计算出基准用量(Var由药物的扩散速度、海水相关金属离子浓度、药物实际有效含量、摄食量四个因子确定)。有效剂量在基准用量×1/2、基准用量、基准含量×2三个浓度范围内进行测定。用死亡数变化、摄食量、生长速度和聚板等指标评估药效和副作用。
3)同时防治两种疾病的药物配制和应用实验:按测定的有效剂量称取两种药物加入抗氧剂等添加剂混匀、压片,数片或称取投喂,方法、疗程同4)。
4)根据药物的性质,按Bid或Tid摄喂。Bid在上午和下午进行;Tid在上午、下午、夜间进行。7天为一疗程,管理与常规同。
3.电镜观察、组织病理
取两种流行病罹病稚鲍,经戊二醛、锇酸双重固定,Epon812包埋制切片,超薄切片用铅、铀盐染色,在JEM100cx电镜下观察、拍照;同期取两种患病稚鲍按常规制备组织切片,观察病原体侵染的组织。
三、结果(流行病学调查、病原体的分离鉴定、超微结构和组织病理另文报告,本文只引用相关结果)
1.病症
病毒性疾病:这种疾病的病原体是一种在细胞质内复制的病毒,主要侵染神经细胞和血液循环系统。被感染的稚鲍较易察觉的早期症状是腹足开始逐渐肿大,行动迟缓,爬行时出现“拖尾现象”。随着病程的发展,腹足继续肿大,侧视可见稚鲍附着态呈隆起状,壳与附着板间距增大,腹足出现明显的神经症状,病苗运动困难或不能爬行,施以干扰,病苗即呈欲行而腹足不听使唤的姿态,用手平行轻推,则会发现病苗附着不牢;稚鲍的排泄功能减退,粪便不能排射到正常位置,降落到壳体及出水孔;病苗体液分泌异常,体表附有一层粘液,SEM和解剖镜检查鲍体含壳粘附有饵料、微藻及粪便,同期病苗停止生长,壳边缘出现刻纹、褪色。随病情继续恶化,到了晚期病苗基本上丧失附着力,较易脱落,脱落苗一般腹足朝上,可清楚观察到死鲍腹足肿大、僵直;脱落频死苗腹足也肿大,其腹足活动较眼和触角迟钝,不能自行翻身附着,助其翻身,仍不能重新附着。罹病稚鲍群体则早期表现为苗无规律的分散,散苗日益增多不聚堆(以下简称散板),病程中期伴有摄食量减少。到发病高期,无附着力的稚鲍增多,稍有外界干扰病苗即脱落,严重时投饵后可见波纹板沟底有许多腹足朝上的脱落苗。此流行病若发生在稚鲍避光期,可观察到夜间上板摄食的苗量减少,剩饵逐日增多的现象,白天滞留在板上的苗也随着病情的加重而增多,病轻的苗在板上聚堆,病重苗则表现为无规律的散板。感染试验初步测定潜伏期约5—7天,病程12—15天,见稚鲍死亡曲线图一对照组。用抗菌素、磺胺类药治疗均无效。
非病毒性流行病;该流行病由立克次氏体所引发的。患病早期稚鲍群体的摄食量、附着力无明显的变化,较易察觉的症状是稚鲍群出现明显的区域性散板,同时白天爬网箱的苗量日渐增多,多为个体小的苗,虽用工具刷回波纹板,不久又会重新爬上来,这是与病毒性疾病早期症状不同之处。随着病程的发展,区域散板愈来愈明显,散板面积越来越大。此时才显现摄食量减少,食欲由减退逐步发展到厌食、避食,投饵后病苗爬至波纹板的高处俗称沟顶,通水后病轻苗陆续爬回沟底。此时若能及时治疗,经三天喂药后,病苗则可治愈恢复正常;该时期若得不到治疗,病情则继续恶化,爬上沟顶的苗便不再返回沟底,常见病鲍抬头侧身,停止摄食,渐渐消瘦而死亡。病鲍及死亡稚鲍壳色灰暗,无鲜艳感,软体消瘦、萎缩,呈壳大肉小状。随着该病的传播面的增大,池底的苗也会被感染,池底罹病苗也爬至池壁接近水面处。病理检查,肠道组织受损,消化腺肿大。]
2.疾病防治
病毒性疾病的防治:1996年进行药物筛选,有效剂量测定结果表明,基准剂量和基准剂量×1/2在防治效果上无明显差别。施用2倍剂量的药物在一定时间内对稚鲍的食欲有些影响,但停药后即可恢复正常。1997年对病毒性流行病防治进行应用试验。给刚剥离的稚鲍喂食两个疗程的抗病毒药物两疗程间停药3天、中药作为预防组;同期汇集相同数量的病苗做为治疗组;设同期剥离不喂食药物稚鲍作为对照组。防治应用试验结果:对照组于第11天显病,稚鲍死亡数逐日增加,18—20天进入死亡高峰期,到30天残废率达84%;喂食抗病毒药物的预防组,鲍苗始终处于稳定状态,筛选结果预防保苗率73%;喂食抗病毒药物治疗组的苗于第5天开始聚板,死亡数呈下降趋势,到第8天,苗情基本上好转,第二疗程结束时,苗情恢复正常,筛选结果保苗率55%;中药组也未发生流行病,但剥离后15天内死亡数多于西药组,20天后死亡正常。预防组、治疗组及对照组的保苗率见表1;各试验组稚鲍死亡曲线见图一。
此时正值车间该病发生的高峰期,采用上述治疗方案对全场200池(含4池对照)苗进行治疗,苗也于用药的第三天出现聚板趋势,摄食量增加,残废数下降,经两个疗程的治疗后,185个池的苗恢复正常,开始生长。其中有11个池的苗死亡数下降到一定水平时就不再降低,经喂食抗非病毒性疾病药物后,死亡数才恢复到正常水平。车间发病及治疗过程中稚鲍死亡变化见图二。
非病毒性疾病:1998、1999两年观察到的病症相同,属同一种非病毒性流行病(见图三)。药物筛选结果表明该流行病对四环素类中的几种抗菌素敏感,用磺胺类抗病毒药物治疗无效,磺胺类药物施用的时机不当,反而加重病情。1998年由于对该病认识不足,出现误诊,错将非病毒性疾病按病毒性疾病治疗,未达到应有的效果。1999年在确诊稚鲍发病类型,于剥离后立即投喂2个疗程的对症抗菌素,实验组稚鲍没有发生流行病,保苗率达71%;对照组发生大的流行病保苗率仅为9%。基准剂量和基准剂量×2都能达到预防效果,防治效果见表1。
在以上两种疾病的防治过程中,也曾出现过当使用一种对症药物防治后,多数池的苗能恢复正常,但也有小部分池的苗死亡率降低到一定程度就不再继续下降,而需喂食另一类药物死亡率才会恢复到正常水平的情形。
两种流行病的综合防治:把两种药物按有效剂量混合在一起,加入抗氧化剂等添加剂,喂食2mm稚鲍18000头,7天为一疗程,连喂2疗程中间停2天,10天后再喂第3疗程,以后每月喂一疗程;另设平行对照组,平行对照组只喂一种对症药物。跟踪观察5个月,两种流行病在稚鲍群中都没有发生。剥离后第43天进行筛选,保苗率达76%,筛选结果见表一,死亡曲线见图四。从表一、图四可以看出平行对照组稚鲍死亡率高于综合防治组,剥离规格综合防治组好于平行对照组。