一、 倍化处理技术
（一）6-DMAP诱导法：
1、器材：
500目、260目筛绢，显微镜，烧杯，量筒，计时电子表，15L塑料桶，1ml啄管，载玻片，棕色容量瓶，解剖工具(蛎钩解剖刀)。
2、药品及配置：
1）二甲基嘌呤（6-DMAP）配置方法：准备好饵料培育藻种的海水（经消毒过滤），提前在容量瓶内将1克药品溶于400ml海水中，摇匀，配置成0.0153mol／L的溶液待用。
2)次氯酸钠溶液：将其溶于海水中，配成5％的浓度，用于消毒。
附：药品用量计算
M1Ｖ1＝M2Ｖ2
Ｖ2＝M2Ｖ2÷M1
M1：0.0153mol／L
Ｖ1：未知量
M2：400μmol／L（6-MAP的倍化处理浓度）
Ｖ2：用量筒提前在15L水桶内定出一个标准体积（生产单位自由掌握）
3、苗室准备
1）成熟种贝：必需是性腺发育饱满，卵黄颗粒均匀，精子活动快。否则授精率低，影响孵化与倍化效果。
2）提前准备25.2℃-25.3℃的预热海水。
4、操作过程：
1）雌雄鉴别：
解剖：派专人解剖种贝，注意解剖时尽量不碰生殖腺，以免精液污染。每解剖一次必须将解剖工具浸入消毒液中消毒一下再用。
鉴别：用载玻片挤出精卵液沾水对光观察，颗粒散开的是雌的。无粒粘稠的是雄的。鉴别后要严格将雌雄种贝分开，载玻片每用一次都要消毒。
2）获卵：
获卵方法：用玻璃片将卵刮入盛25℃海水的容器内桶或烧杯。
定量：将卵液用260目筛绢过滤到15L的水桶内，定量。一般取1ml卵液稀释1000倍镜下定量。要求卵数在倍化处理时密度达到2万--3万个／ml。
3）授精：取多枚雄贝的精液（10--20枚），用少量泼入卵液中授精，搅拌均匀。同时计时。最好能检查一下授精情况，一般一个卵子周围有5个左右精子为宜，越少越好。授精5--6分钟以后，用500目筛绢滤出卵子，倒入标定好体积的水桶内，加水至定容线。15分钟时加药进行倍化处理。（这次过滤是为了滤出精子）
注：提前过滤是因为500目网过滤速度很慢，必须提前过滤，否则会延误倍化处理时间。定容的方法是用量筒量出一个标准体积，在桶上划线做标记，即为定容线。
4）倍化处理；15分钟时加入6-DMAP溶液，用量筒量Ｖ1数量的药液，倒入盛卵水桶内，使倍化处理浓度达到400μmol／L。处理15分钟，在12-13分钟时开始用500目网过滤。因过滤速度慢，需要提前过滤。
最后再向滤网中加水洗卵几次，滤好后入池孵化。（这次过滤是为了滤出药品）
注：在受精15分钟时处理是为了抑制第一极体的出现。
5）孵化：水温25℃。
以后育苗程序、技术、操作、管理如二倍体育苗。
（二）咖啡因诱导法：
1、器材：
260目筛绢、量筒、计时电子表、15L塑料桶、1ml啄管、载玻片、解剖工具50-100L左右的大容器、牙签。
2、药品及配置：
咖啡因：倍化处理浓度为10mmol／L，配置方法：2g／L，需提前2小时用高温水化开溶解，可以自配一定浓度，用时用量筒量出需要的药品量。
消毒；用热开水
3、苗室准备：
1）准备成熟种贝
2）准备25℃、35℃预热海水
4、育苗操作
1）雌雄鉴别：
解剖：同上
鉴别：用牙签挑生殖液沾到玻璃片上观察，挑完一个扔掉一个牙签。玻片在开水中消毒。鉴别后将种贝分开。
2）获卵：方法同上。要求卵数在倍化处理时密度达到1万个／ml。
3）授精：方法同上。授精后20分钟准备进行倍化处理。
4）倍化处理：在受精时间达到22-23分钟时，进行倍化处理。将Ｖ1体积的受精卵倒入Ｖ2体积的35℃的海水中，配置成Ｖ3体积的32℃-34℃的倍化海水，同时加入使V3体积海水达到10mol／L浓度的药品，进行倍化处理，处理15分钟后入池。
温度换算公式：25℃×Ｖ1＋35℃×Ｖ2＝（32－34℃）×Ｖ3
Ｖ3＝Ｖ1＋Ｖ2
注：入池前最好进行温度缓冲，即加入25℃海水降温。缓冲处理可在12分钟内进行。缓冲处理可避免温差大使受精卵受刺激，影响孵化率。在受精22-23分钟时，即第一极体刚一出现时进行倍化，这是为了抑制第二极体的出现。
5）孵化：在15分钟时，将受精卵倒入25℃孵化池中孵化。
以下操作基本同二倍体苗，只是需要在选育后第3天进行倒池。因为咖啡因处理，对卵损伤较大，幼虫畸形较多，此时倒池会淘汰掉畸形和死亡幼虫，避免污染水质。
二、看法与设想
这两项技术都在我区进行了生产实践，经过验证：6-DMAP处理法比较可靠，育苗三次，虽然效果有所差异，但都基本上获得了成功，比较适于普及推广。而咖啡因--温度休克法却在几次实践中遭到失败。总结教训，虽然原因众多，但也发现这一技术还存在有许多不稳定因素，不易掌握。因此它的可靠性和技术的成熟度，还需在以后的生产实路中经过验证和提高。
通过实践，我们从成功与失败中吸取了许多宝贵的经验教训，对这一技术大家都有了比较深的认识，下面是我们的一些看法与设想。
1、针对6--DMAP诱导法
这一方法具有安全可靠，操作比较方便，孵化率、倍化率、幼虫成活率都比较高的特点。一般孵化率可达30％-40％，倍化率可达50％以上。但在操作中500目网的两次过滤处理比较占时费力。而且药品和500目网都比较紧张，价格也比较昂贵。
但我们按如下成本换算：
药品用量 1000元/克
0.0652g → 62.5元
↑400μmol/L浓度处理
倍化处理时受精卵密度按3000万/ ml
↓孵化率30%
900万D形幼虫
↓成活率30%
270万眼点幼虫
↓20%变态附着
54万稚贝
↓40个/片
1.35万片
由上可见，处理3000万卵用药费用65.2元，下壳1.35万片。每片可折药品成本65.2元÷1.35万片＝0.005元／片。通过上述计算我们可以看出，药品投入成本与育苗收益相比完全可以忽略不计，而且500目网成本为500元／m2，可以多年重复利用，也不会占多大育苗成本。所以我们认为此法在生产中确实可行。
我们在实践中发现，此法的两次过滤比较繁琐，占时较多，如果网不够用，则会延长操作处理时间。经过讨论，认为这种过滤处理似乎没有必要。因为：1）人工受精的精子数量可以人为控制。而且根据二倍体的生产实践，多余的精子不会对孵化产生多大的影响，所以可以不滤出精子。2）倍化处理时，加入的1克、2克药物，下到大池后的浓度会被稀释到很小，如此小的浓度按理不会对生产产生多大的影响。专家们对这一提议也表示赞同，因为过滤手段来源于传统的ＣＢ诱导法，实验过程中一直采用传统操作法，在大生产中是否可以简化，还没有进行实验，但是理论上应该可行。所以在以后的生产实践中，在药品充足的前提下，我们可以对这一技术改革进行实践验证。如果此法可行，那么6-DMAP诱导法在生产中将会变得更加简单、方便。
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