微藻饵料培养一般区分为:实验室培养和生产性培养两种方法。实验室培养依据使用目的不同,又可分为单种培养和“克隆”无菌培养。一般作饵料用时,只要做到单种培养就可以,如要进行生理生化试验,有时须进行“克隆”无菌培养,生产性培养一般区分为一级、二级和三级培养。一级是藻种活化培养。二级是藻种扩大培养,三级是投喂饵料的培养。
(1)单种或克隆培养:单种即指培养的藻种可以是1个以上的母源细胞分裂繁殖起来的,其母源细胞只要在显微镜下确认是同一分类种就行。“克隆”则严格标藻种必须是1个母源细胞分裂繁殖起来的子孙(克隆内的遗传性状全部是一样的)。这类培养除了杂藻和原生动物必须摒除外,细菌等微生物是允许与微藻同时存在的。培养容器一般使用玻璃试管和50-100毫升的三角烧瓶,在自然温度和自光照下,封闭式静止培养,每天轻轻摇动两次,也可以在光照、温度人工可控的空调室或或培养箱中培养。根据不同藻种的生物学特性。每1-2个月更新接种一次。
(2)克隆“无菌培养:无菌培养有洗涤法、抗菌素法、紫外线法等。其中抗菌素法较为方便有效。 但各种微藻和微生物对不同抗菌素的不同浓度耐受力不同,在进行微藻无菌培养时,要作多次试验,才能筛选出适宜的抗菌素种类和浓度。
这里介绍一种简便的抗菌素法:在琼脂平板中央放上些青霉素、链霉素、红霉素等抗菌素的晶体或粉末,任其自由扩散,再在平板上划线或喷雾接种上微藻。在强光和较低温度下培养15天以上。平板上有些位置上的抗生素浓度正好对细菌有抑制或杀死作用,而微藻尚能存活,能生长出一些藻落,镜检后将这些藻取出接种入试管中培养,就有可能达到无菌分离培养的目的。
现在国外使用环丝氨酸50毫克/升(杀灭霉菌)和环己酰亚胺5毫克/升(杀灭细菌)作微藻的无菌分离培养,效果较好,可试用。
微藻中的细菌或霉菌是否已被杀死。这还需在细菌培养基上作无菌检验,如果这种微藻培养物在黑暗中培养15天(25-30℃),没有发现细菌或霉菌生长,就认为是无菌分离培养成功,但细菌在短时间生长后就会死亡,所以在检测定的期间内,要随时经常检查,必要时要用相差显微镜来检定。
(3)一级培养:平时实验室的藻种,为了延长接种间隔时间,往往使藻种生长处于比较抑制的状态,所以在藻种生产开始前1-2个月,就需要将要使用的藻种预先进行活化培养,取原始藻种到新鲜培养液中,置于最适培养条件下培养,使藻种尽快达到指数生长期,以后每隔1周左右扩种一次,一直使这部分藻种处于旺盛的指数生长期。培养容器主要是200-5000毫升的三角烧瓶,进行封闭式静止境中养,每天轻轻摇瓶5-6次。
(4)二级培养:将经活化处理的藻种,扩大接种到10000-20000毫升的玻璃细口瓶中,也有使用透明玻璃钢容器或透明聚乙烯薄膜袋作容器的,一般在1000立方米的对虾育苗场或200-300立方米的扇贝育苗场,应备有10000毫升的细口瓶100-200个,原则上应采取封闭静止培养,防止意外的生物污染,细口瓶的消毒、摇瓶、搬动等都较方便,缺点是比较笨重和易破碎,玻璃钢容器或薄膜袋则不易消毒,封闭静止培养时管理困难,需要用通气方式来搅拌藻液,
(5)三级培养:微藻三级培养的容器主要是用敞口的水泥池,底及壁最好能用白色瓷砖铺盖。饵料培养池的水体与动物育苗水体的比例:对虾育苗为1:10,扇贝育苗为1:2-1:3(以0.5米水深计)。培养池呈长方形,面积5-15平方米,池深0.5-0.8米,饵料室须用平板玻璃或透明玻璃钢波形瓦(透光率大于70%)覆顶,四壁须有较宽大的窗户,晴天时光照强度应达到10000勒克斯以上,另外也可用农用圆筒式聚乙烯薄膜,平铺在光滑地面上,两端绑扎一塑料硬管,稍稍吊起抬高,由一端通入压缩空气,另一端作出气口,作“地龙”式培养。或将直径较细的筒状薄膜对折成“V”字形,将两端吊在支架上,底部坐在水泥或木板平台上,作悬空式培养。或用矩形框架式薄膜袋培养。这些培养方式的优点是污染程度轻,有时可在露天培养,特别是在早春气温较低时,培养效果较敞口水池更好。缺点是薄膜容易破损,造成藻液严重渗漏,以致培养失败,如果改用较厚(0.10-0.12毫米)的尼龙聚乙烯复合薄膜,破损问题可以解决,价格虽高些,但可多次重复使用。三级培养一般都采用通气式培养,每立方米培养水体的通气坚贞不屈可控制在60-70升空气/分钟。如果用CO2可将压力瓶中的CO2通入气体混合室内,配成含1-3%CO2的空气混合气体通入培养藻液中,可以缓慢地连续通气,在封闭式高密度培养中,也可较大量地进行间隙通气,通入量视温度、光照、PH等具体情况而定。
在原生动物多发地区,通气培养容易引起敌害生物的污染,所以在用水泥池培养时,可用静止式培养,只是在白天用长把丁形搅棒搅动藻液5-6次,搅拌时要上下、左右四面搅动,不要使藻体形成旋涡,以免造成培养物的局部沉积。
在三级培养中另一个值得注意的问题是,如果是新建的水泥池,因水泥泛硷,PH升高,一定要多次洗刷,浸泡1个月以上才能使用,如果时间紧促,也可在池子内壁涂刷RT-176防水乳液两扁后使用。

